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诺诗公司临床诊断试剂
LIFECODES公司HLA-SSO配型试剂
LIFEMATCH HLA-SSO配型的基本原理是将标记的单链PCR产物杂交到SSO探针。普通的PCR扩增使用等量的正反向引物,得到双链DNA产物。但是,如果正反向引物的量不一致,扩增将会得到单链DNA和双链DNA的混合产物。在LIFEMATCH扩增的起始的循环中先产生双链DNA,当量少的引物耗尽时,量多的引物会以双链DNA产物为模板扩增得到单链DNA产物。通过这种方法得到的单链DNA和双链DNA的混合产物可用于接下来的变性及杂交。
每个探针和扩增产物中特异的等位基因或等位基因簇有一致的序列,也就是说,这些探针与DNA产物中可能存在或者不存在的互补区域优先杂交,而且,与所有等位基因的某个位点序列一致的一个或者几个共有探针可以与扩增DNA产物杂交。SSO配型受生物材料、纯化方法、基因组DNA的量和完整性的影响,所以,探针的对照信号可以作为扩增与杂交成功的指示。同时,探针的对照信号也可以用来对等位基因特异探针的信号做归一化处理并且校正用于杂交的扩增产物的量的变化。分析SSO配型结果可以确定扩增DNA产物中的特异序列存在与否,从而确定样品的可能的等位基因。
在LIFEMATCH
HLA-SSO配型程序中,探针吸附到luminex100配套的luminex100磁珠上。最多100种luminex100磁珠可以混在一起并用luminex100分析,每种磁珠可以通过特异的荧光信号或者颜色区分开来。一种SSO探针可以吸附到一种磁珠上,所以,几个探针的混合物可以通过与它们相连的磁珠的颜色区分开来。luminex100可以确定杂交到磁珠上的PCR产物的相对量。因此,LIFEMATCH化验获得的SSO探针相关的信号和其他SSOP方法一样,用来确定与扩增的DNA样品产生的阴性或阳性反应的探针的配盘,从而得出决定样品的HLA类型的信息。
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